Панина Т. В., Малик Н. И., Уша Б. В., Мацулевич Т. В
ФГУ «ВГНКИ», МГУПБ, ЗАО «Партнер»
За последние годы в ветеринарии приобрела особую актуальность проблема роста патологий гепатобилиарной системы.
Современные экологические условия, увеличение интенсивности воздействия химико-физических и биологических факторов, а также чрезмерное назначение лекарственных препаратов, в том числе антибиотиков и гормонов, несбалансированное кормление создают предпосылки к росту гепатопатий.
При этом большая часть гепатобилиарных патологий этиологически и патогенетически взаимосвязана с желудочно-кишечными патологиями.
Доказано, что печень и микрофлора кишечника участвуют в процессах печеночно-кишечной рециркуляции различных органических и неорганических соединений. Следовательно, печень и микрофлора пищеварительного тракта являются двумя взаимосвязанными детоксикационными системами организма.
При этом повреждение печеночных клеток, снижение их функциональной активности неизбежно ведет к увеличению воздействия токсических веществ на кишечную микрофлору, что может являться причиной нарушений микробиоценоза кишечника, в свою очередь, эти нарушения индуцируют детоксикационную функцию микрофлоры, тем самым, увеличивая токсическую нагрузку на печень.
Одним из перспективных направлений в комплексном решении проблемы печеночных и желудочно-кишечных патологий является создание новых комбинированных препаратов – пробиотиков — гепатопротекторов, использование которых способствует своевременной детоксикации организма, восстановлению гепатобилиарной и желудочно-кишечной систем, а также будет являться эффективным инструментом в компенсации патологии печени и нарушении микробиоценоза.
В настоящее время в нашей стране на рынке ветеринарных препаратов нет отечественных комбинированных препаратов, в состав которых входит композиция пробиотических штаммов и гепатопротективного компонента.
Целью наших исследований явилась разработка нового комплексного пробиотика — гепатопротектора, изучение его влияния на гепатобилиарную систему и восстановление микробиоценоза кишечника собак в комплексной терапии гепатитов.
Разработанный препарат пробиотик — гепатопротектор «Биопротектин»®, содержит очищенный сухой экстракт, получаемый из плодов расторопши пятнистой (Silybum marianum), и лиофилизированную массу живых антагонистически активных бактерий вида Bifidobacterium bifidum штамм № 1, Lactobacillus fermentum № 90Т-С4, иммобилизированных на лактулозе – синтетическом дисахариде и сорбированных на полисорбе.
Клинические испытания проведены на 48 собаках различных пород обоего пола. Для этого были сформированы три группы животных: по 10 собак в каждой, с разными весовыми категориями (до 5 кг, от 5 -10 кг, свыше 10 кг).
За клиническим состоянием животных вели наблюдения в течение 30 дней.
Исследования проб крови, а также проб фекалий животных проводили до применения препарата, затем на 3, 7, 14 и 23 день исследований.
Оценку эффективности препарата «Биопротектин»® проводили по результатам клинических наблюдений, биохимических и клинических анализов крови, а также по результатам бактериологических анализов проб фекалий собак. Влияние исследуемых препаратов на микробиоценоз кишечника оценивали по динамике формирования популяции бифидобактерий, лактобацилл, энтерококков и кишечной палочки, как наиболее индикаторных групп микроорганизмов нормофлоры кишечника.
Клинический осмотр животных выявил общее угнетенное состояние со сниженной динамической активностью. Во всех случаях наблюдалась брадикардия и полипное. В 89 % случаев были отмечены рвота и диарея. наблюдали иктеричность слизистых оболочек ротовой полости и склер глаз у 65 %, а также выявляли болезненность при пальпации в области печени и гепатомегалию.
Исследования кишечного микробиоценоза собак с токсическим гепатитом, до применения препарата «Биопротектин»® установили статистически достоверное (р<0,05) снижение количества лактозопозитивных эшерихий до показателя 5,56±0,19 lg КОE/г – у собак в первой группе; 6,02±0,49 lg КОE/г – во второй группе и 6,48±0,14 lg КОE/г – в третьей группе.
Количество выделенных эшерихий со сниженной ферментативной активностью составило 6,73±0,24 lg КОE/г у собак в первой группе; 7,03±0,20 lg КОE/г – во второй группе; 7,57±0,31 lg КОE/г – в третьей группе, сформированных для оценки терапевтической эффективности препарата «Биопротектин»®. Кроме того, полученные данные свидетельствуют о том, что при токсическом гепатите в пробах фекалий собак значительно увеличивается количество условно патогенных микроорганизмов, таких как сальмонеллы.
В кишечном микробиоценозе больных собак с большой долей достоверности (р<0,01) уровень энтерококков достигал значения 6,67±0,17 lg КОE/г в первой группе; 6,54± 0,09 lg КОE/г – во второй группе и 6,47±0,52 lg КОE/г – в третьей группе, а также 6,41±0,07 lg КОE/г; 7,01±0,07 lg КОE/г; 7,78±0,14 lg КОE/г. Фактор токсикоза вызвал незначительное увеличение популяционного уровня коагулазонегативных стафилококков до 3,66±0,16 lg КОE/г в первой группе, 4,16±0,18 lg КОE/г во второй группе и 4,22±0,28 lg КОE/г в третьей группе. Уровень лактобацилл у собак с токсической формой гепатита так же был занижен и составлял в первой группе 6,11±0,69 lg КОE/г, во второй – 6,81±0,31 lg КОE/г и в третьей – 6,29±061 lg КОE/г и, соответственно, уровень бифидобактерий составил в первой группе 7,48±0,04 lg КОE/г, 8,03±0,05 lg КОE/г – во второй группе и 8,42±0,32 lg КОE/г – в третьей группе.
Дрожжи были выделены так же у 100% животных: 4,49±0,014 lg КОE/г – в первой группе; 4,77±0,43 lg КОE/г – во второй дгруппе и 4,54±0,09 lg КОE/г – в третьей группе, подобранных для испытаний с препаратом «Биопротектин»®. У собак всех групп при исследовании кишечного микробиоценоза до применения терапии были выделены микроорганизмы рода Протей. В опытной группе показатели составили 2,57±0,17 lg КОE/г в первой группе; 3,56±0,41 lg КОE/г – во второй группе и 3,82±0,04 lg КОE/г – в третьей группе.
Таким образом, характер изменения микроэкологии кишечника у собак с токсическим гепатитом свидетельствовал о наличие дисбактериоза.
Применение препарата «Биопротектин»® на 7 день улучшило показатели микробиоценоза кишечника во всех группах исследуемых собак. Отмечена статистически достоверная тенденция к снижению количества условно патогенных микроорганизмов. Однако следует отметить, что препарат «Биопротектин»® значительно повысил уровень энтерококков, лактобацилл и бифидобактерий, тогда как в группах с контрольным препаратом «Легалон» уровень пробиотичекой флоры увеличился незначительно.
Применение препарата «Биопротектин»® на всех сроках исследований, начиная с 14 дня, значительно влияло на повышение уровня лактофлоры и бифидобактерий, при этом популяционный уровень лактобацилл и бифидобактерий увеличился и достиг показателей нормобиоза.
На фоне увеличения пула пробиотической флоры было отмечено статистически достоверное снижение уровня условно патогенных микроорганизмов уже через 14 дней применения препарата «Биопротектин»®.
Результаты биохимических исследований крови собак, показали явные отклонения от нормы в сторону увеличения по показателям АлАт, АсАт, холестерина, общего билирубина, щелочной фосфатазы, ЛДГ, общего белка, альбумина, глобулинов.
Так, показатели АлАт у собак в опытной группе варьировали от 88,24±0,03 до 96,66±0,03 МЕ/л, при этом показатель АсАт варьировал от 85,10±0,01 до 111,20±0,03 МЕ/л.
Концентрация ЛДГ составляла 165,10±0,01 Е/л; 171,50±0,02 Е/л; 160,20±0,04 Е/л, а щелочной фосфатазы 77,30±0,4 МЕ/л; 82,10±0,3 МЕ/л; 93,30±0,06 МЕ/л в. Показатели общего билирубина превышала норму и составили 3,83±0,02 мкмоль/л; 4,10±0,02 мкмоль/л; 3,60±0,03 мкмоль/л. Показатели холестерина также были выше нормы и составили 10,60±0,03 ммоль/л; 9,90±0,01 ммоль/л; 10,20±0,03 ммоль/л, при этом показатель глюкозы превысил нормативный показатель лишь в одном случае в опытной группе, что составило 6,43±0,01 ммоль/л.
Количество общего белка варьировало от 73,60±0,30 до 75,60±0,20 г/л.
Влияние препарата «Биопротектин»® на биохимические показатели кровив сторону улучшения были зарегистрированы у собак во всех группах.
При этом щелочная фосфатаза и ЛДГ имели тенденцию к снижению уже на 7 день терапии, тогда как показатели АлАт и АсАт оставались на прежнем уровне.
Наиболее заметные изменения имели место при применении препарата «Биопротектин»® в комплексной терапии гепатитов на 23 день. Показатели белка, билирубина, и индикаторных ферментов AлАт и АсАт, ЛДГ, ЩФ и холестерина приблизились к норме.
При оценке функции гепатобилиарной системы собак с токсическим гепатитом по клиническому анализу кровиво всех случаях было зафиксировано значение гематокрита в опытных группах 44,20±0,30%; 43,50±0,05%; 44,80±0,30%. Показатели гемоглобина составили 9,60±0,02 г/дл; 11,50±0,05 г/дл; 10,20±0,40 г/дл, что ниже нормативного показателя.
Кроме того, у больных собак было зафиксировано повышение СОЭ до показателей: 9,00±0,60 мм/ч; 8,26±0,90 мм/ч; 13,10±0,90 мм/ч. При этом значения показателей лейкоцитов находились в пределах физиологической нормы.
Анализ лейкограммы у собак, больных токсическим гепатитом, выявил отклонение от физиологической нормы. Так, например, палочкоядерные нейтрофилы составляли 6,50±0,03%; 3,50±0,005%; 4,00±0,02%, что превышает физиологическую норму. Относительное количество сегментоядерных нейтрофилов составляло 36,20±0,03%; 36,10±0,02%; 32,80±0,20%, находясь в пределах нормы так же, как эозинофилы и моноциты. Следует отметить, что показатели базофилов и юных нейтрофилов незначительно завышали верхние границы нормы.
Влияние препарата «Биопротектин»® на восстановление морфологических показателей крови собак. На 3 день во всех группах, не показали существенных изменений, что связано, вероятно, с высокой степенью интоксикации организма животных.
Однако уже на 7 день комплексной терапии нами было отмечено увеличение гематокрита и гемоглобина. При этом уровень СОЭ и лейкоцитов во всех группах с препаратом «Биопротектин»® находился в пределах нормы.
К 23 дню терапии наблюдалась положительная динамика восстановления показателей крови животных во всех группах.
Таким образом, применение препарата «Биопротектин»® имело положительный эффект, при этом следует отметить, что восстановление клинических показателей крови животных к концу срока исследования.
Нами установлено, что применение препарата «Биопротектин»® в комплексной терапии токсических гепатитов у собак способствует восстановлению микробиоценоза кишечника за счет повышения популяционного уровня бифидобактерий с 7,48±0,04 lg KOE/г; 8,030±0,005 lg KOE/г; 8,42±0,32 lg KOE/г до 8,96±0,16 lg KOE/г; 9,03±0,05 lg KOE/г; 9,51±0,10 lg KOE/г и лактобацилл с 6,11±0,69 lg KOE/г; 6,81±0,32 lg KOE/г; 6,29±0,61 lg KOE/г до 7,82±0,07 lg KOE/г; 7,99±0,51 lg KOE/г; 8,01±0,18 lg KOE/г соответственно, а также снижения интенсивности колонизации кишечника условно патогенными микроорганизмами; обеспечивает восстановление биохимических показателей крови, что проявляется позитивной тенденцией развития активности гепатоэнзимов АлАт и АсАт и ЛДГ, нормализацией активности щелочной фосфатазы до пределов физиологической нормы, следствием чего является стабилизация физиологического состояния и увеличение массы тела животного. Эффективность терапии обусловлена более быстрой дезинтоксикацией и регенерацией гепатоцитов за счет двойного действия препарата, как на гастроинтестинальную, так и на гепатобилиарную системы.